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农药登记急性毒性试验方法

作者: 来源: 日期:2019/1/8 15:51:45 人气:58

在农药登记申请资料中,毒理学中的急性毒性试验在对农药进行安全性评价时是必不可少的,急性毒性试验不仅为农药急性毒性的强弱提供依据,也为其他毒理学试验剂量设置提供参考价值。本文简述了急性毒性试验中的急性经皮、急性经口和急性吸入试验。

急性经口毒性试验--序贯法

Acute oral toxicity-- UDP

1. 定义

急性经口毒性Acute oral toxicity

机体一次或在24h内多次经口给予受试物后,动物在短期内出现的健康损害效应。

半数致死剂量 median lethal dose

LD50  

 在规定时间内,能引起实验动物总体中半数死亡的剂量。以实验动物单位体重接受受试物的质量表示(mg/kg体重)


2. 试验目的

评估受试物毒性,为急性毒性分级提供依据;

通过短时间经口染毒,初步评价毒物的毒性特征和剂量-反应关系;

为其他毒理学试验剂量的选择提供依据;

便于标签的管理。


3. 试验方法

序贯法up-and-down-procedureUDP

是一个阶梯式的染毒程序。使用单一性别的动物,一次染毒1只。第一只动物的染毒剂量最好低于LD50的估计值。后续动物染毒剂量的增减取决于前一只动物的染毒结果(存活或死亡);在不能获得受试物LD50的初步估计值及剂量-反应曲线斜率资料时,计算机模拟结果提示起始剂量可选择175mg/kg,采用0.5的反对数(对应于一个默认的剂量级数因子3.2)计算剂量间距。以最大似然法计算LD50的点估计值和95%可信区间。

受试物

受试物可配置成水溶液、油溶液或悬浮液。

试验动物

可选用鼠龄在8~10周内的SD大鼠或Wistar大鼠,单一性别,通常采用雌性动物。

染毒操作

由限量试验和正式试验组成。限量试验染毒剂量为5000mg/kg体重,最多使用5只动物。正式试验的起始剂量在无法得到受试物致死剂量的估计值时,可默认为175mg/kg体重。所设定的剂量序列为:1.75 mg/kg体重,5.5 mg/kg体重,17.5 mg/kg体重,55 mg/kg体重,175 mg/kg体重,555 mg/kg体重,2000 mg/kg体重或1.75 mg/kg体重,5.5 mg/kg体重,175 mg/kg体重,55 mg/kg体重,175 mg/kg体重,555 mg/kg体重,1750 mg/kg体重,5000 mg/kg体重。一次染毒一只动物,每只动物的染毒间隔时间为48h。第二只动物染毒剂量取决于第一只动物的染毒结果,如动物死亡或呈濒死状态,剂量下调;如动物存活,剂量上调。当后续剂量出现与起始剂量相反的染毒结果时,追加4只动物序贯染毒后结束试验,或当达到任一终止试验的规定时,可结束试验。动物数大约6~9只。


4. 观察指标

在染毒后24h以及14d的观察期内,每天定时观察并详细记录每只动物的中毒反应,主要包括:中枢神经系统和神经肌肉系统、植物神经系统、呼吸系统、泌尿生殖系统、皮肤和被毛、消化系统和眼;以及包括体重的称量(染毒前、染毒后和处死前)和毒理学检查。

 


急性经皮毒性

Acute dermal toxicity

1. 定义

急性经皮毒性Acute dermal toxicity

机体连续接触24h经皮肤染毒受试物所产生的健康损害效应。

半数致死剂量 median lethal dose

LD50  

 在规定时间内,能引起实验动物总体中半数死亡的剂量。以实验动物单位体重接受受试物的质量表示(mg/kg体重)


2. 试验目的

评估受试物对实验动物所产生的毒性,为急性毒性分级提供依据;

初步了解受试物能否经皮肤吸收和毒性作用模式;

为其他毒理学试验剂量的选择提供依据;

便于标签的管理。


3. 试验方法

实验前去除实验动物受试部位的被毛,将实验动物至少分成3组,每组涂不同剂量的受试物,然后观察实验动物中毒反应和死亡情况,对试验只死亡和试验结束时处死的动物应做大体解刨,计算LD50 95%可信区间。

受试物

液态受试物一般使用原液;固态受试物应将其研磨成粉状过100目筛,并用水等介质充分湿润。

试验动物

首选最敏感的性别体重在200g~300g的大鼠,也可选用体重在2.0kg~3.0kg的白色家兔或体重在350g~450g的豚鼠。

染毒操作

限量试验一次染毒两种性别各5只动物,染毒剂量为2000 mg/kg体重或5000 mg/kg体重。实验前24h,在动物背部正中线两侧去毛,染毒面积不应少于试验动物体表面积的10%,将受试物均匀涂布于实验动物的去毛区,覆盖一层不渗透材料后再以2~8层的多孔纱布覆盖,并用无刺激胶布或绷带甲乙固定,接触24h后取下固定物和覆盖物,用温水或适当的方法清除皮肤上残留的受试物。至少设3个剂量组,每一剂量组不少于5只。


4. 观察指标

每天观察一次,连续14d,不超过21d,观察至少包括:中枢神经系统和神经肌肉系统、植物神经系统、呼吸系统、泌尿生殖系统、皮肤和被毛、消化系统和眼;以及包括体重的称量(染毒前、染毒后和处死前)和毒理学检查。

 

急性吸入毒性

Acute inhalation toxicity

1. 定义

急性吸入毒性Acute inhalation toxicity

机体在短时间内24h24h之内一次连续吸入较高浓度的受试物(气体、蒸汽、气溶胶或颗粒状物)出现的健康损害效应。

半数致死剂量 median lethal dose

LC50  

 在规定时间内,经呼吸道一次连续吸入受试物后,能引起实验动物总体中半数死亡的剂量。以单位体积空气中受试物的质量表示(mg/m3


2. 试验目的

评估受试物对实验动物所产生的毒性,为急性吸入毒性分级提供依据;

为其他毒理学研究提供科学的参考资料;

为制定生产和应用过程中的防护措施提供依据;

便于标签的管理。


3. 试验方法

采用机械通风装置,连续不断地将含有一定浓度受试物的空气均匀地送入染毒柜,换气量大约为12/h~15/h,维持相对稳定的染毒浓度。采用全身暴露或头/鼻部暴露方式对动物进行持续4h的急性吸入。如果采用动物全身暴露的染毒方式,为确保染毒柜内空气稳定,应当注意使实验动物的总体积不超过染毒柜体积的5%

受试物

受试物应采用制备工艺稳定、符合质量标准规定的样品,注明名称、来源、批号、含量、保存条件、配置方法和检验报告。

试验动物

首选8~10周的健康大鼠,体重差异不得超过同性别体重的±20%。正式试验之前,动物应在试验环境中检疫、适应3d~5d时间,饲养条件应符合GB14925的有关规定

染毒操作

采用试验准备阶段的各种适宜条件,对染毒浓度、可吸入颗粒直径等进行控制。

至少设置3个不同浓度的染毒组,每个浓度组至少10只动物,雌雄各5只。如果受试物的毒性很低,也可以采用20只大鼠(雌雄各半),进行单一剂量的急性吸入毒性试验,单一急性吸入染毒浓度应为体积分数2×10-2(气体受试物)、20mg/L(液体受试物蒸汽)、5mg/L(固体或液体受试物气溶胶)


4. 观察指标

每天观察1次,连续14d,不超过21d,观察至少包括:中枢神经系统和神经肌肉系统、植物神经系统、呼吸系统、泌尿生殖系统、皮肤和被毛、消化系统和眼;以及包括体重的称量(染毒前、染毒后和处死前)和毒理学检查。

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